CONTINUACION DE AGARES

AGAR EMB:

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.


AGAR SANGRE:
Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.
Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de reacciones de hemólisis.
También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.

AGARES

1º
Se lavaron las cajas de petri, matraces erlenmeyer y pipetas.

2º
Se me metio a esterilizar el material de vidrio en el autoclave.

3º
Para preparar los agares es necesario sacar el peso de los agares en ml de agua para prepararlos.

4º
Ya pesados los agares se disuelven en agua y se dejan reposar por 15 minutos, ya terminado de reposar se calientan en un mechero con agitacion frecuente para desaparecer los grumos.
Se ajusta el pH de los agares hasta que queden neutros.

5º
Se vuelven a meter a esterilizar los agares en un autoclave durante 15 minutos a una temperatura de 121ºc.

6º
Se dejan enfriar y durante el tiempo de enfriamiento se limpia la mesa con jabon, alcohol y benzal. Y se colocan 2 mecheros fisher para eliminar las bacterias que estan en el aire.

7º
Una vez ya frios los agares y, limpias las mesas los agares se distribuyen en las cajas de petri y se eliminan las burbujas con un mechero flameandoce.
(al agar sangre se le añadio lo equivalente en ml de sangre). Se dejan reposar hasta que se solidifique.

8º
Los agares ya distribuidos en las cajas y solidificados se meten al refrigerador volteadas de modo que el agar quede hacia arriba para evitar cualquier contaminacion. Durante 24hrs.

9º
Se toman las muestras con un isopo previamente esterilizado ( la muetra se puede tomar de cualquier superficie, pero nosotros la tomamos de la garganta) y se siembran en todas las cajas, empezando con el manitol posteriormente el mac conkey o emb y al final el sangre.

10º
Ya sembradas las muetras en las cajas (solo por una orilla) se calienta un asa y se distribuye la muetra por la caja haciendo un barrido.
11º
Ya sembradas y distribuidas las muestras en las cajas se meten en la incubadora durante 24hrs y se observan para ver si hay crecimiento si no hay se esperan otras 24hrs y si no hay otras 24hrs y si no aparece nada no hubo crecimiento.

12º
Si hay crecimiento las cajas se observaran asi:
AGAR MANITOL:

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.






AGAR MAC CONKEY:

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en
el mismo.

Tincion de gram



TINCION DE GRAM•



EQUIPO: Mechero, Microscopio óptico, Platina caliente, Portaobjetos, Guantes, Cubrebocas, Hisopos, Frascos goteros.

SUSTANCIAS: Colorante cristal violeta, Colorante de safranina, Aceite de inmersión, Lugol, Alcohol etílico absoluto, Colorante carbolfucsina, Colorante azul de metileno, Solución de alcohol-acetona, Solución de alcohol ácido.

TÉCNICA:1. Hacer un extendido delgado del material para estudio, y permitir que se seque al aire. 2. Fijar el material al portaobjetos, pasándolo tres o cuatro veces a través de la llama de un mechero de bunsen, de modo que el material no se lave durante el procedimiento de tinción. Se recomienda el uso de alcohol para fijar el material a ser teñido con Gram (cubrir el extendido con metanol o etanol por unos pocos minutos). 3. Colocar el extendido en una bandeja para teñido, y cubrir la superficie con una solución de cristal-violeta. 4. Después de un minuto (con algunas soluciones puede emplearse menos tiempo) de exposición al colorante de cristal violeta, lavar minuciosamente con agua destilada o buffer. 5. Cubrir el extendido con la solución de yodo para Gram durante 1 minuto. Lavar nuevamente con agua. 6. Sostener el extendido entre el pulgar y el índice, y cubrir la superficie con unas pocas gotas del decolorante alcohol-acetona, hasta que no se arrastre mas violeta. Esto lleva usualmente 10 segundos o menos. 7. Lavar con agua corriente y volver a ubicar el extendido sobre la bandeja de tinción. Colocar sobre la superficie safranina de contraste durante un minuto. Lavar con agua corriente. 8. Ubicar el extendido en posición vertical en una bandeja de tinción, permitiendo que se escurra el exceso de agua y el extendido se seque. 9. Examinar el extendido bajo un objetivo de inmersión x 100(aceite).

Las bacterias grampositivas se tiñen de azul obscuro; las gram negativas aparecen rosa pálidas.



COLORACIÓN ALCOHOL-ACIDO-RESITENTESREPORTE DE LA PRÁCTICA.Tipo de muestra: Eses fecales y saliva. Característica de la muestra:se mustran en racimos en cadena y extendidos. El tamaño es de 4x,10x,40x y 100x. Estas son las que observamos se observa que las celulas son de diferentes morfologias y su tamaño es diferente a las demas

Y se muestran los dos tipos d gram las positivas que son las de color azul y las negativas que son las de color rosa.

CONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

PRACTICA 1: CONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE MICROBIOLOGIA

1. Conocimiento del material de microobiologia


procedimiento


1) Recorrido por el laboratorio


2)visualizar material representaticion


pipeta draduada porta y cubre objetos microscopio

mateaz elnmeyer jeringas

cajas de petril vidrio de reloj

asas de plitino horno de secado

tubos de capilares encubadora

mecheros ficher autoclave

refrigerador



1)¿uales son las reponsabilidades de cada una de las partes involucradas (maestros,alumnos,ect.)

para logras un acuerdo de trabajo plastico en micrroobiologia?


R= Responsabilisarse enseñando a los alumnos y alumnos y ayudarlos en los estudios2)como podrias colavorar con tu comunidad con practicas de los microorganismosR=ESTUDIANDO LA ZONA3) ¿Describe de seguridad que consideren mas importantes para el buen funcionamiento de las practicas?R= Utilizar labata,no tirar los resipientes realizar las practicas4)QUE indicadores debes de sueguir al preparar en caja de petril?R=Medios de cultivo y cajas de petril5)¿Que debes de aser en caso de una muestra de micrrorganismos parogenos?R= Analizarla y mantenerla aislada6)¿Consideras que las instalaciones son adecuadas?R=Si son adecuadas7)¿Tienes una sugerencia para mejora?R= Si conprar equipo nuevo para el laboratorio

MEDIOS DE CULTIVOS

1. AGAR NUTRITIVO

Uso general en bacteriologia

• Preparacion:

Suspender 50g del polvo en un litro de agua destilada. mezclar bien y dejar en reposos 15 minutos. calentar a ebullicion de 1 a 2 minutos. distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

• Formula para 1000ml de agua destilada:

Peptona de Gelatina 5.0g

Extracto de Carne de Res 3.0g

Agar 15.0g

pH final 6.8 +- 0.2

ALTAMENTE HIGROSCOPICO

2. AGAR MAC CONKEY

Medio empleado para aislar e identificar enterobacterias y coliformes a partir de heces feclaes, orinas, aguas negras y diversos alimentos.

• Preparacion:

Suspender 50g del medio deshidratado en un litro de agua purificada. Mezclar bien hasta que se obtenga una suspension uniforme. Dejar reposar de 10 a 15 minutos. Calentar suavemente agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15 munitos.

AGENTE DE DIAGNOSTICO

• Formula aproximada para 1000ml de agua purificada:

Peptona de Caseina 1.5g

Peptona de Gelatina 17.0g

Peptona de Carnes 1.5g

Lactosa 10.0g

Sales Biliares 1.5g

Cloruro de Sodio 5.0g

Agar 13.5g

Rojo Neutro 0.03g

Cristal Violeta 0.001g

pH final 7.1 +- 0.2
Ajustar o suplementar como se requiere para cumplir los criterios de funcionalidad.

ALTAMENTE HIGROSCOPICO


3. AGAR SANGRE

Para aislar y cultivar microorganismos exigentes y detectar actividad hemolitica por adicion con sangre.

• Preparacion:

Suspender 40g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar perfectamente, calentar con agitacion frecuente y hervir durante un minuto hasta disolucion completa. Distribuir y esterilizar a 121ºC por 15 minutos. Para la preparacion de placas con sangre, enfriar la base a 45ºC y adicionar 5% de sangre esteril desfribinada.

• Formula para 1000ml de agua destilada:

Extracto de Levadura 5.0g

Infusion de Musculo Cardiaco (solido) 2.0g

Peptona de Caseina 13.0g

Cloruro de Sodio 5.0g

Agar 15.0g

pH final 7.3 +- 0.2

ALTAMENTE HIGROSCOPICO

4. AGAR VERDE BRILLANTE

Selectivo para el aislamiento de Salmonella.

• Preparacion:

Suspender 58g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar perfectamente y calentar agitando frecuentemente. Hervir por un minuto. Distribuir y esterilizar en autoclve a 121ºC durante 15 minutos.

• Formula para 1000ml de agua destilada:

Pesptona de Carne 5.0000g

Extracto de Levadura 3.0000g

Peptonas de Caseina 5.0000g

Cloruro de Sodio 5.0000g

Lactosa 10.0000g

Sacarosa 10.0000g

Rojo Fenol 0.0800g

Verde Brillante 0.0125g

Agar 20.0000g

pH final 6.9 +- 0.2

ALTAMENTE HIGROSCOPICO

5. AGAR DE SAL Y MANITOL

Medio selectivo empleado para aislar estafilococos patogenos de materiales clinicos diversos (orina, genitales, heridas, exudados, gangleos, etc). Tambien se utiliza en la industria alimenticia en los mismos fines.

• Preparacion:

Supender 111g. del polvo en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar agitando frecuentemente. Hervir durante un minuto hasta disolucion completa. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

• Formula aproximada para 1000ml de agua purificada:

Extracto de Carne 1.0g

Peptona de Carne 5.0g

Peptona de Caseina 5.0g

Cloruro de Sodio 75.0g

D - Manitol 10.0g

Agar 15.0g

Rojo Fenol 0.025g

pH final 7.4 +- 0.2